【正清学术】青藤碱对博莱霉素致小鼠肺纤维化的影响及机制研究

研究青藤碱对肺纤维化小鼠模型的干预作用及其机制。

将180只小鼠采用随机数字表法随机分成6组,每组30只。分别为：正常对照组(A组)、肺纤维化模型组(B组)、地塞米松干预组(C组)、青藤碱低剂量干预组(D组)、青藤碱高剂量干预组(E组)、N-乙酰半胱氨酸组(F组)、于第0天B、C、D、E、F各组小鼠均给予气管内一次性注入盐酸博莱霉素(5mg/kg),A组气管内一次性注入等量生理盐水。

自造模术后第一天起：C、D、E、F组小鼠分别给予地塞米松2mg/kg、青藤碱40mg/kg、青藤碱80mg/kg、N-乙酰半胱氨酸250mg/kg,A和B组小鼠给予等量生理盐水每天一次灌胃干预,各组于实验第7、14、28天分别随机处死10只。

取肺泡灌洗液做细胞计数及分类；取右肺组织经甲醛固定后做HE.MASSON染色以评价肺泡炎和肺纤维化程度,用免疫组化SABC去测肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达；左肺组织取下立即冻存于液氮中,用实时荧光定量逆转录PCR法测肺组织匀浆TGF-β1和α-SMA的rnRNA表达；用碱水解法测肺组织匀浆羟脯氨酸(HYP)含量；用比色法测定小鼠肺组织匀浆中总抗氧化能力(TAC)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的含量。

(1)各组小鼠BALF细胞计数及中性粒细胞比例比较：B组在第7、14、28天细胞总数及中性粒细胞比例较A组明显增加,而C.D.E.F组均较B组降低,第7、14天D组和E组显著高于C组(F=161.25,74.21,72.39,80.67,33.24,148.27,均P0.01),第28天C.D.E.F组间无差异。

(2)各组小鼠肺泡炎和肺纤维化评分比较：B组在第7、14、28天肺泡炎和肺纤维化评分均较A组明显增加,C.D.E.F组肺泡炎和肺纤维化评分均较B组降低,第7、14天D、E、F组肺泡炎评分高于C组(F=97.06,114.44,53.64,43.40,33.30,92.49,均P0.01)第28天肺泡炎评分和各时间点肺纤维化评分C.D.E.F组间无差异。

(3)各组小鼠肺组织TGF-β1和α-SMA的表达比较：B组各时间点TGF-β1和α-SMAmRNA的表达均较A组增高,而C.D.E.F组均较B组显著降低(F＝143.51,57.25,27.66,50.27,41.09,5.62,均P0.01),C.D.E.F组间无差异。B组各时间点TGF-β1和α-SMA蛋白吸光度值均较A组增加,而C.D.E.F组均较B组显著降低(F=8.42,32.07,62.49,33.73,105.62,246.83,均P0.01),C、D、E、F组间无差异。

(4)各组小鼠肺组织HYP含量比较：B组各时间点肺组织中HYP的含量均较A组增高,而C组各时间点均低于B组；第7天HYP含量D、E、F组与B组无差异而高于C组,第14、28天HYP含量D、E、F组低于B组(F＝118.39,41.72,61.55,P0.01,P0.05),第28天C、D、E、F组间无差异。

(5)各组小鼠肺组织TAC含量比较：B组各时间点肺组织中TAC的含量均较A组明显降低,C、D、E、F组各时间点肺组织中TAC的含量均高于B组(F=54.85,50.93,11.35,P0.01),C、D、E、F组间无差异。

(6)各组小鼠肺组织MDA的含量比较：B组各时间点组织中MDA的含量较A组增高,而C、D、E、F组各时间点均低于B组(F=518.62,335.01,49.98,均P0.01),C、D、E、F组间无差异。

(7)各组小鼠肺组织MPO的含量比较：B组各时间点肺组织中MPO的含量均较A组增高,第7及14天C、D、E、F组均低于B组(F=300.92,238.29,1.44,P0.01,P0.05),第28天C、D、E、F组与B组无差异,各时间点C、D、E、F组间无差异。

青藤碱能够减轻盐酸博来霉素诱导的小鼠肺泡炎及肺纤维化,其抗肺纤维化的作用强于抗肺泡炎的作用,其机制可能通过抗氧化、抑制TGF-β1和α-SMA的mRNA和蛋白的表达及减少肺组织中HYP含量而实现。

内容摘自“门翔、李蕴麟等. 青藤碱对博莱霉素致小鼠肺纤维化的影响及机制研究.中华结合和呼吸杂志，2012年.”