摘要:
运用噬菌体表面呈现技术，从禽流感病人恢复期血中获得淋巴细胞，通过基因工程手段，构建了人源抗H5N1禽流感病毒基因工程抗体文库。用纯化的人源H5N1禽流感病毒颗粒（A／Anhui／1／2005）及重组血凝素蛋白HA（A／Viet Nam／1203／2004）对Fab噬菌体抗体库进行富集筛选，成功地获得了抗禽流感病毒H5N1血凝素蛋白HA的人源单抗Fab段基因，并在大肠杆菌中获得有效表达。通过序列测定确定抗体轻重链型别，然后将阳性克隆的轻链和重链Fd段基因分别克隆人全抗体表达载体pAC—L-Fc后转染昆虫Sf9细胞，利用杆状病毒／昆虫细胞系统实现全抗体的分泌型表达。用ELISA、IFA和流式细胞术对所获人源单抗的功能特性进行鉴定。结果表明，我们获得了2株特异性针对H5N1禽流感病毒血凝素蛋白HA而与甲1型和甲3型人流感病毒无交叉反应的人源单抗（AVFluIgG01、AVFluIgG03）。微量中和试验结果表明，除A／Guangdong／1／2006外，AVFlu—IgG01能够广泛地中和HA基因进化上属于Clade 2的中国南方、北方及中部地区的H5N1禽流感病毒分离株，同时还对属于Clade I的越南H5N1分离株A／VietNam／1203／2004具有中和活性；AVFluIgG03虽然不能中和A／VietNam／1203／2004，但是对属于Clade 2的所有中国H5N1分离株均具有中和作用。人源中和性抗禽流感病毒H5N1基因工程全抗体的获得不仅为高致病性禽流感病毒H5N1的预防和治疗带来了希望，同时也为其疫苗研制提供了新的思路。
