摘要:
为了构建更为安全有效的抗低致病性H9亚型禽流行性感冒(流感)的基因工程疫苗,将包含有H9亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因、鸡Ⅱ型干扰素(IFN-Ⅱ)全长cDNA序列及调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子(PE/L)的基因片段,定向插入鸡痘病毒转移载体1175的痘苗病毒启动子P7.5的下游,得到HA和IFN-Ⅱ基因分别处于P7.5及PE/L转录调控下的重组转移载体1175HAIFN.以脂质体转染法将1175HAIFN转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中.1175HAIFN与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-HA-IFN-Ⅱ.通过在含X-gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPV-HA-IFN-Ⅱ.以间接免疫荧光法和细胞病变抑制试验证实,纯化的rFPV-HA-IFN-Ⅱ感染的CEF能以非融合的方式同时表达HA和具有抗VSV活性的鸡IFN-Ⅱ.动物试验表明,rFPV-HA-IFN-Ⅱ能显著抑制静脉攻毒后1日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡从泄殖腔排毒,且能减轻单表达HA的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)抑制1日龄SPF雏鸡增重的副作用.
