甘蓝型油菜脂肪酸链延长酶基因FAE1的克隆与原核表达

《应用与环境生物学报》 郭经宇[1];王茂华[1];刘绵学[1];王慧[1];徐柯[1];杨毅[1];李旭锋[1]
摘要:
脂肪酸延长酶1(FAE1)是广泛存在于植物中并定位于内质网上的一种能催化脂肪酸碳链延长的酮脂酰CoA合成酶.根据Genbank上已知的植物FAE1基因设计引物,以从甘蓝型油菜叶片中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增,获得了1380bp的片段.回收该片段,并连接到pMD18-T载体测序.序列比对结果说明了该片段与植物中已知的FAE1序列有极高的相似性,并且不存在内含子序列.将该片段通过高保真酶扩增,EcoRI酶切消化后定向克隆到pGEX-2T表达载体中,在IPFG诱导下于28℃表达出M,76×10^3的蛋白质条带.用兔抗GST多克隆抗体做第一抗体进行Western-blot检测,并获得阳性检测结果.这为甘蓝型油菜脂肪酸链延长酶基因FAE1功能的进一步研究奠定了基础.图4表1参14
甘蓝型油菜 , 脂肪酸链延长酶1 , 融合蛋白 , 原核表达
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