摘要:
【目的】得到适用于罗布麻RAPD的最优体系。【方法】以伊犁地区新源县罗布麻硅胶干燥叶片为材料,采用TIANGEN试剂盒提取罗布麻基因组DNA,得到满足RAPD（Random amplified polymorphic DNA）分析的罗布麻基因组DNA。【结果】通过单因素优化实验,得到罗布麻RAPD分析的最佳反应体系为：Mg2＋（2.0mmol/L）、dNTPs（0.5 mmol/L）、primer（0.4 mmol/L）、DNA（1μL）、Taq酶取1μL、10×buffer取1μL,总反应体系为10μL;扩增程序为：在94℃下预变性,然后进行42个循环（94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2min）,最后在72℃延伸7 min。【结论】提取的罗布麻总DNA均有较高的质量,适合RAPD分析;Tiangen植物基因组DNA提取试剂盒对罗布麻基因组DNA有着良好的提取效果;对罗布麻RAPD-PCR中Mg2＋、dNTPs、DNA聚合酶和引物浓度进行优化,较为理想的各因子用量和扩增程序为：Mg2＋（2.0 mmol/L）、dNTPs（0.5mmol/L）、primer（0.4 mmol/L）、Taq酶（0.5 U/μL）、DNA（40 ng）,总反应体系为10μL;扩增程序为：在94℃下预变性5 min,然后进行42个循环（94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2 min）,最后在72℃延伸7 min。
