摘要:
利用穿梭粘粒载体pNJ_1组建了麦迪霉素产生菌Streptomyces mycarofaciens 1748的基因文库,用与麦迪霉素生物合成有类似途径的放线紫红素聚酮合成酶基因Act Ⅰ,Act Ⅲ为探针,从麦迪霉素产生菌的基因文库中,获得了与Act Ⅰ,Act Ⅲ基因有同源性的阳性克隆,对其中PCNSB12、6C5及11E11克隆DNA进行了酶切分析,其分子量分别为36kb,48.5kb及41.6kb。PCN6C5 DNA中包含有PCN 8812的全部DNA片段,PCN JIEII与PCN 8B12及PCN 6C5有6.75kb的重叠区。通过分子杂交实验,初步将麦迪霉素聚酮合成酶基因定位在PCN 8812 DNA的EcoR Ⅰ-BamH Ⅰ 4.02kb片段上(与Act Ⅲ基因有同源性)及PCN 8812(6C5),PCN11E11DNA Bg Ⅲ-Bg Ⅲ 2.42kb与PCN11E11 Bgl Ⅱ-Bgl Ⅱ 10kb片段上(与Act Ⅰ基因有同源性)。PCN 8812及PCN 6C5克隆DNA在麦迪霉素聚酮合成酶基因缺陷型变株Streptomyces mycarofaciens var.68及不产抗生素的变铅青链霉菌Streptomyces lividans TK24受体菌的表达产物,经TLC及HPLC等分析表明与麦迪霉素标准品相似。
